Production ,Purification and Characterization of Glucoamylase by Some Fungal Isolates

Abstract

Abstract The Study was performed to Investigate the best Fungus isolate for producing Glucoamylase enzyme .125 soil samples were collected from various sources from six localities, Metema, Shandi, Damer, Atbara, Berber and, Abu hamad. Sources included corn stores, kitchens, agricultural land and desert. Each sample was taken from the soil, and one gram from each soil was dissolved in 10 ml sterile distilled water in test tubes capacity 20 ml. Tubes were incubated at 80 ° C for ten minutes. Equipped barley extract environment then inoculated from the previous pipe. And put the dishes in the Incubator at a temperature of 27 ° C for 48 hours.. Selected 55 colony from different sources and then transferred again to malt extract agar and placed in Incubator at a temperature of 27 ° C for 48 hours .Starch media was prepared and then vaccinated dishes above and incubated in the same grade the previous heat dishes flooded with a solution of iodine to test the biodegradable starch. 25 samples were selected based on the decomposition of starch and be Clean halo around the colony .We are choose 9 samples depending on higher production of the enzyme and then transferred to agar malt extract environment. Equipped with liquid amylase production environment and then vaccinated the previous samples. Edit the source of carbon in the environment above (starch) and other carbon sources, found that the highest production of the enzyme was found when using starch as the carbon source and concentration of 4.0 g / L. Edit the source of nitrogen in the environment above (concrete) other sources of nitrogen. Highest production of the enzyme log when you use malt extract carbon source and that at a concentration of 1.5 g / L. Replace the metal Magnesium (MgSO4) salts other metals, the best production of the enzyme record when using magnesium sulfate concentration of 10 g / L. Written different concentrations of sodium chloride and found that sodium chloride negative impact on the production of the enzyme where the highest production of the enzyme at the lowest concentration of salt, is 10 g / L. Then change the PH values and the best production of the enzyme at 6.0 PH value when changing the temperature was found that the highest production of the enzyme has been recorded at a temperature of 55 m. The production of the enzyme was measured at different time intervals highest production of the enzyme record after 5 days of incubation. Nine samples were selected according to the best conditions for the production of an enzyme and then used in the production of the enzyme in accordance with the conditions above. Were measured activity of the enzyme product according to special conditions included: the time period of 10-60 minutes, the highest activity recorded at 30 m temperature between 10-60 higher activity of the enzyme record temperature of 50 m, the values of the PH between 3-8, the highest activity of the enzyme log when the value of 4.0 PH use of different sources of nitrogen activity was highest when using malt extract a concentration of 2.0 g / L and finally carbon sources, where he found that the highest activity of the enzyme may log when we used starch as the action of the enzyme concentration of 4 g / L Chosen as the best samples of the enzyme 5 above, used in advanced trials, which included: purification of the enzyme and comparison with the enzyme product isolated from a sample of corn stores at Gadarif ..

ملخص البحث تنقية وقياس نشاط إنزيم الجلوكواميليز المنتج بواسطة بعض المعزولات الفطرية تهدف هذه الدراسة إلى اختبار أفضل المعزولات الفطرية المنتجة لإنزيم الجلوكواميليز, كما تهدف إلى اختبار انسب الظروف لإنتاج هذا الإنزيم . جمعت 125 عينة تربة من مختلف محليات ولاية نهر النيل حيث شملت محليات : المتمة ’ شندي ’ الدامر ’ عطبرة ’بربر و ابوحمد و قد شملت مصادر التربة : مخازن الذرة ’المطابخ ’التربة الزراعية والتربة الصحراوية . وقد تم إجراء التجارب في الفترة بين مارس 2012 و ابريل 2013 في العزل الأولي للعينات اختيرت أفضل 10 معزولات اعتمادا على النشاط العالي للإنزيم المنتج علي البيئات الصلبة . عند اختبار إنتاج الإنزيم في البيئات السائلة سجلت كل العينات اعلي إنتاج لها عند استخدام النشا كمصدر للكربون وذلك بتركيز 4.0جرام/ لتر . و قد سجلت العينة Aspergillus oryza ABCH أعلى إنتاج حيث بلغ 9.1 ملجرام/لتر . عند استخدام مستخلص الشعير كمصدر للنيتروجين العضوي بتركيز 2.0 جرام/لتر , سجلت كل المعزولات اعلي إنتاج للإنزيم و قد سجلت العينة Curvalaria sp ADSS 11.2 ملجرام/لتر كأفضل معزولة . من بين كل المعادن المستخدمة في إنتاج إنزيم الجلوكواميليز كانت كبريتات الماغنيزيوم Mg SO4 هي الأفضل وذلك بتركيز 1.0 جرام/لتر حيث سجلت العينة Aspergillus oryza ATD 8.9 ملجرام/لتر كأعلى إنتاج . عند درجة الحموضة 6.0 سجلت كل العينات اعلي إنتاج للإنزيم و عنده سجلت العينة Aspergillus oryza SHSS 10.8 ملجرام/ كأعلى إنتاج من بين باقي المعزولات . أعلى إنتاج للإنزيم سجل بعد 5 أيام من الثحضين حيث سجلت العينة Aspergillus oryza ATD 14.8 ملجرام/لتر كأعلى إنتاجية وذلك عند درجة حرارة . 55°C في قياس نشاط الإنزيم المنتج بواسطة المعزولات الفطرية المختلفة استخدمت عدة عوامل شملت :الزمن بالدقائق ، الحموضة ، تركيزات مختلفة من مصدر النيتروجين (مستخلص الشعير) ، تركيزات مختلفة من مصدر الكربون (النشا) و درجة الحرارة . أعلى نشاط للإنزيم سجل عند 50 دقيقة ، درجة حموضة 4.0 ، درجة حرارة 50°C وذلك عند تركيز 2.0 جرام/لتر و 4.0 جرام/لتر من كل من مستخلص الشعير و النشا على التوالي . عند تنقية الإنزيم بواسطة كبريتات الامونيوم (NH4SO4)ارتفع نشاط الإنزيم كثيرا حيث وصل 160.0 ملجرام/لتر للعينة Aspergillus oryza ATD و ذلك عند 50 دقيقة ، درجة حموضة 4.0 ، درجة حرارة 50°C و تركيز 2.0 جرام/لتر و 4.0 جرام/لتر من كل من مستخلص الشعير و النشا على التوالي . عموما كانت المعزولة Aspergillus oryza ATD هي الأفضل في إنتاج إنزيم الجلوكواميليز من بين بقية المعزولات و ذلك تحت ظروف الإنتاج المختلفة .